黃曲霉毒素總量（B1、B2、G1、G2、M1、M2）免疫親和柱

【概要】

黃曲霉毒素(AFT)是一類化學結構類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)產生的次生代謝產物，在濕熱地區食品和飼料中出現黃曲霉毒素的機率最高。黃曲霉毒素被世界衛生組織(WHO)的癌癥研究機構劃定為1類致癌物，是一種毒性*的劇毒物質.黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也*。B1是最危險的致癌物，經常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測到。它們在紫外線照射下能產生熒光，根據熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT已發現20余種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類、堅果類、肉類、乳及乳制品、水產品等均有黃曲霉毒素污染。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的*。

【適用范圍及性能】

本公司真菌毒素免疫柱系列產品測試形式是一個高性能的免疫親和柱，設計用于在進行 HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質譜聯 用 儀)、ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)之前清理(凈化)或 濃縮樣本。

用于定性、定量檢測谷物、副食品、酒類等食品和飼料等樣本中的黃曲霉毒素總量(B1,B2,G1,G2)時的樣品前處理。

柱容量：≥200ng

回收率：≥85%

【試驗原理】

本產品的測定的基礎是抗原抗體反應，黃曲霉毒素單克隆抗體連接在柱內凝膠上，樣品中的黃曲霉毒素經過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過黃曲霉毒素免疫親和層析柱，在免疫親和柱內，毒素與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫黃曲霉毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測。

【包裝組成】

黃曲霉毒素總量標準品(選配)

25支/盒，3mL柱管/支

產品說明書1份

【需要而未提供的設備及試劑】

設備：

┅┅高速均質器或組織勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平：感量0.1g

┅┅微量移液器：單道 100ml～1000ml

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)

試劑：

┅┅甲醇(色譜級)

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS)：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調節pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL

┅┅吐溫-20/PBS溶液(0.1%)：取1mL吐溫-20，加入PBS緩沖溶液并定容至1000mL

【試劑配制】

樣品提取液：根據不同的樣品配置不同濃度的甲醇水溶液，作為樣品提取液。

【樣本處理步驟】

(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料

┅┅取25g粉碎的樣品(植物油脂直接取樣，無需處理)與125mL甲醇-水(7：3)溶液混合；

┅┅加入5.0g氯化鈉以均質器高速攪拌，提取2分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測；

┅┅將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

(二)醬油

┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水(8：2)溶液混合；

┅┅加入2.5g氯化鈉以均質器高速攪拌，提取1分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入40mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測；

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

(三)食醋

┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；

┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入10mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測。

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

【結果判定】

經免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當于1g樣品中黃曲霉毒素含量。

【注意事項】

┅┅黃曲霉毒素危害極大，應戴手套操作。

┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件：親和柱2-8℃保存，不可凍存

保存期：該產品有效期為12個月。

真菌毒素免疫親和柱